A kutatásban különböző transzgénikus és knockout egérvonalakat alkalmaztak, beleértve a KrasLSL−G12D/+; p53fl/fl (KP) tüdőrákot fejlesztő modellt, valamint a Trpv1-cre, Rosa26LSL−DTR, Vglut2-cre és más specifikus neuronális vagy immunsejtekhez kötődő Cre-expresszáló vonalakat. Ezeket egymással keresztezték, hogy célzottan manipulálhassák a különböző sejttípusokat, például a vagális érzéki neuronokat (VSN-eket) vagy a szimpatikus idegrendszert. A daganatindukciót autochton (intratracheális adenovírusos Cre-adagolás) vagy ortotóp transzplantációs (intravénás KP sejtek beadása) modellekben végezték. A neuronális áramkörök célzott befolyásolásához kemogenetikus (DREADD) és optogenetikus módszereket, valamint anterográd és retrográd vírusos nyomkövetést alkalmaztak. Az immunsejtek szerepének vizsgálatához bone marrow chimera kísérleteket, valamint specifikus sejtpopulációk (pl. CD4+, CD8+ T-sejtek, alveoláris makrofágok) depletionjét végezték antitestekkel vagy klodronát liposzómákkal.
A sejtszintű analízisek közé tartozott a flow citometria és a FACS rendezés a tüdő és nyirokcsomó minták immunphenotípusának meghatározásához, valamint a sejtek funkcionális válaszainak (pl. citokinek termelése) vizsgálata. In vitro kultúrákban értékelték a tumor-kivonatok (TES, TCM) hatását a vagális érzéki neuronok (VSN-ek) neurit kiindulására, valamint a noradrenalin hatását a tumorsejtek proliferációjára és az alveoláris makrofág-szerű sejtek gén expressziójára. Hisztológiai és immunofluoreszcens színezéseket alkalmaztak a tüdőszövet, az agy (pl. RVLM régió) és a ganglionok (pl. nodosus ganglion) szerkezeti és molekuláris vizsgálatára. A háromdimenziós idegrost-hálózat megjelenítéséhez whole-mount tisztítási (CUBIC, iDISCO) és multiplex képalkotási technikákat használtak. A noradrenalin szintet HPLC-vel mérték a tüdőszövetben. A molekuláris mechanizmusok feltárásához RT-qPCR-t, valamint single-cell RNA szekvenálást (scRNA-seq) végeztek az egészséges és tumorhordozó egerek nodosus ganglionjaiból izolált VSN-eken, amely lehetővé tette a tumor által indukált transzkripciós változások azonosítását.
A klinikai relevancia értékeléséhez a The Cancer Genome Atlas (TCGA) tüdőadenocarcinoma (LUAD) betegadatait elemezték. A VSN-ekre és a szimpatikus idegekre jellemző gének expressziós aláírását összekapcsolták a betegek túlélési adataival, és korrelációt mutattak ki a magas aláírás-expresszió és a rosszabb prognózis, valamint a csökkent CD8+ T-sejt aktiváció között. A statisztikai elemzésekhez GraphPad Prism szoftvert alkalmaztak, kétcsoportos összehasonlításokhoz kétoldali t-próbát, többcsoportos összehasonlításokhoz ANOVA-t használva. Az összes állatkísérletet etikai irányelvek szerint végezték, az egereket specifikus patogénmentes körülmények között tartották.
Ez a cikk a Neural News AI (V1) verziójával készült.
Forrás: https://www.nature.com/articles/s41586-025-10028-8.
A képet The New York Public Library készítette, mely az Unsplash-on található.
